Floresan süzgüji, floresan mikroskopynda möhüm komponent. Adaty ulgamda üç sany esasy süzgüç bar: tolgundyryjy süzgüç, zyňyndy süzgüji we iki aýna. Topar mikroskopda birleşdirilmegi üçin adatça kubda gaplanýar.
Floresan süzgüji nähili işleýär?
Tolgundyryjy süzgüç
Tolgundyryjy süzgüçler belli bir tolkun uzynlygynyň ýagtylygyny berýär we beýleki tolkun uzynlyklaryny bloklaýar. Diňe bir reňkiň bolmagy üçin süzgüçi sazlap, dürli reňk öndürmek üçin ulanylyp bilner. Tolgundyryjy süzgüçler iki esasy görnüşde bolýar - uzyn geçiş süzgüçleri we zolakly süzgüçler. Tolgundyryjy, adatça, diňe florofor tarapyndan sorulýan tolkun uzynlyklaryndan geçýän zolakly süzgüç bolup, floresan beýleki çeşmeleriniň tolgunmasyny azaldýar we floresan zyňyndy zolagynda tolgundyryjy çyranyň öňüni alýar. Suratdaky gök çyzykdan görnüşi ýaly, BP 460-495, bu diňe 460-495nm floresan arkaly geçip biljekdigini aňladýar.
Floresan mikroskopyň yşyklandyryş ýoluna ýerleşdirilip, floroforyň tolgundyryş aralygyndan başga ýagtylyk çeşmesiniň ähli tolkun uzynlyklaryny süzýär. Süzgüçiň iň az geçirişi şekilleriň ýagtylygyny we parlaklygyny görkezýär. Islendik tolgundyryjy süzgüç üçin azyndan 40% geçiriş, iň gowusy> 85% bolmagy maslahat berilýär. Tolgundyryjy süzgüçiň geçirijilik giňligi tutuşlygyna florofor tolgundyryş çäginde bolmaly, süzgüçiň merkezi tolkun uzynlygy (CWL) floroforyň iň ýokary tolkun uzynlygyna mümkin boldugyça ýakyn bolmaly. Tolgundyryjy süzgüç optiki dykyzlygy (OD) fon suratynyň garaňkylygyny görkezýär; OD, süzgüç tolkun uzynlyklaryny geçiriş aralygyndan ýa-da geçirijilik giňliginden näderejede bloklaýar. Iň az 3.0 OD maslahat berilýär, ýöne 6.0 ýa-da ondan uly OD idealdyr.
Zyňyndy süzgüji
Zyňyndy süzgüçleri, nusgadaky islenýän floresan detektoryna ýetmäge mümkinçilik berýär. Has gysga tolkun uzynlyklaryny bloklaýarlar we has uzyn tolkun uzynlyklary üçin ýokary geçirişe eýe. Süzgüç görnüşi san bilen hem baglanyşykly, mysal üçin şekildäki BA510IF (päsgelçilik barýer süzgüji), bu belgi iň ýokary geçirişiň 50% -inde tolkun uzynlygyny aňladýar.
Tolgundyryjy süzgüçler üçin şol bir maslahat beriş zyňyndy süzgüçleri üçin hem degişlidir: iň az geçiriş, geçirijilik giňligi, OD we CWL. Iň oňat CWL, iň az geçiriş we OD kombinasiýasy bolan zyňyndy süzgüji, iň çuňňur blokirleme bilen mümkin bolan iň aýdyň şekilleri üpjün edýär we iň gowşak zyňyndy signallarynyň tapylmagyny üpjün edýär.
Dichroic aýna
Dikroik aýna, tolgundyryjy süzgüç bilen zyňyndy süzgüçiniň arasynda 45 ° burçda ýerleşdirilýär we zyňyndy signalyny detektora ugradanda florofora tarap tolgunma signalyny görkezýär. Iň oňat ikitaraplaýyn süzgüçler we şöhle bölüjiler iň ýokary şöhlelenme bilen iň ýokary geçirişiň arasynda ýiti geçişlere eýe bolup, tolgundyryjy süzgüçiň geçirijilik ukyby üçin 95% şöhlelendirme we zyňyndy süzgüçiniň zolagy üçin> 90% geçiriş bilen. Floroforyň kesiş tolkun uzynlygy (λ) bilen süzgüçi saýlaň, azaşýan ýagtylygy azaltmak we floresan şekil signalyna-ses derejesini ýokarlandyrmak üçin.
Bu şekildäki ikitaraplaýyn aýna DM505 bolup, 505 nanometr bu aýna üçin iň ýokary geçirişiň 50% -inde tolkun uzynlygydyr. Bu aýna üçin geçiriş egrisi 505 nm-den ýokary geçirijiligi, 505 nanometriň çep tarapyna geçirişiň gaty peselmegini we 505 nanometriň çep tarapynda iň ýokary şöhlelendirişini görkezýär, ýöne şonda-da 505 nm-den pes geçiş bolup biler.
Uzyn geçiş bilen zolakly geçiş süzgüçleriniň arasynda näme tapawut bar?
Floresan süzgüçleri iki görnüşe bölüp bolar: uzyn geçiş (LP) we zolakly geçiş (BP).
Uzyn geçiş süzgüçleri uzyn tolkun uzynlyklaryny geçirýär we has gysgalaryny bloklaýar. Kesilen tolkun uzynlygy iň ýokary geçirişiň 50% -indäki bahadyr we kesileniň üstündäki ähli tolkun uzynlyklary uzyn geçiş süzgüçleri arkaly geçirilýär. Olar köplenç aýnalarda we zyňyndy süzgüçlerinde ulanylýar. Uzyn aýlawly süzgüçler, programma iň ýokary zyňyndy ýygnamagy talap edende we spektral diskriminasiýa islenilmeýän ýa-da zerur bolmadyk ýagdaýynda ulanylmalydyr, bu adatça fon awtofloresensiýasynyň pes derejesi bolan nusgalarda ýeke-täk çykýan görnüşi döredýän zondlar üçin bolýar.
Zolakly süzgüçler diňe belli bir tolkun uzynlygy zolagyny geçirýär we beýlekilerini bloklaýar. Ftorofor zyňyndy spektriniň diňe iň güýçli böleginiň ýaýramagyna ýol açyp, pyýada ýörelgesini azaldýarlar, awtofloresensiýa sesini azaldýarlar we şeýlelik bilen uzyn süzgüçleriň hödürläp bilmeýän ýokary fon awtofloresensiýa nusgalarynda signal-ses sesini gowulandyrýarlar.
“BestScope” floresan süzgüç toplumynyň näçe görnüşini üpjün edip biler?
Süzgüçleriň käbir adaty görnüşlerine gök, ýaşyl we ultramelewşe süzgüçler girýär. Tablisada görkezilişi ýaly.
| Süzgüç toplumy | Tolgundyryjy süzgüç | Dichroic aýna | Barýer süzgüji | LED lampa Tolkun uzynlygy | Arza |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485nm | · FITC: Floresan antikor usuly · Kislotaly mämişi: DNK, RNK · Auramine: Inçekesel bacillus · EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | · Rodamin, TRITC: Floresan antikor usuly · Propidium ýod: DNK · RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | · Awto-floresan syn · DAPI: DNK boýagy · Hoechest 332528, 33342: Hromosoma reňklemek üçin ulanylýar |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | · Katekolaminler · 5-gidroksi triptamin · Tetrasiklin: Skelet, dişler |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | · Cy5 · “Alexa Fluor 633”, “Alexa Fluor 647” |
Floresan satyn alyşlarynda ulanylýan süzgüç toplumlary, iň köp ulanylýan floroforlaryň töwereginde ýerleşýän floresan programmalarynda ulanylýan esasy tolkun uzynlyklarynyň töwereginde düzülendir. Şol sebäpli, DAPI (gök), FITC (ýaşyl) ýa-da TRITC (gyzyl) süzgüç kublary ýaly surata düşürmek üçin niýetlenen floroforyň adyny göterýärler.
| Süzgüç toplumy | Tolgundyryjy süzgüç | Dichroic aýna | Barýer süzgüji | LED lampa Tolkun uzynlygy |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450nm |
| Texas Red | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
Floresan süzgüçini nädip saýlamaly?
1. Esasanam multipoton tolgunmasyny we umumy içerki şöhlelendiriş mikroskopyny ulanmak üçin gowşak ses, şekillendiriş effektine uly päsgelçilik döreder, şonuň üçin signalyň ses derejesine bolan talap has ýokarydyr.
2. Ftoroforyň tolgunma we zyňyndy spektrini biliň. Gara fon bilen ýokary hilli, ýokary kontrastly şekil döredýän floresan süzgüç toplumyny gurmak üçin, tolgundyryjy we zyňyndy süzgüçleri, floroforyň tolgundyryş derejelerine ýa-da zyňyndylaryna laýyk gelýän sebitlerde iň az geçiş zolagy bilen ýokary geçişe ýetmeli.
3. Floresan süzgüçleriniň çydamlylygyna serediň. Bu süzgüçler, “ýanmagyna” sebäp bolup bilýän ultramelewşe (UV) ýagtylygy döredýän güýçli ýagtylyk çeşmelerine duýgur bolmaly däldir, esasanam yşyklandyryş çeşmesiniň doly güýjüne sezewar bolýar.
Dürli floresan nusga şekilleri
Çeşmeler internetde ýygnalýar we tertipleşdirilýär we diňe öwrenmek we aragatnaşyk üçin ulanylýar. Düzgün bozulan bolsa, pozmak üçin biziň bilen habarlaşmagyňyzy haýyş edýäris.
Iş wagty: 09-2022-nji dekabry